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武汉博士德生物工程有限公司
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抗体、ELISA 试剂盒、细胞库 / 细胞培养、试剂、技术服务
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开学季 | ELISA实验又失败，问题出在哪？（文末有福利）
人阅读 发布时间：2018-09-03 17:29
大师姐：“你这次ELISA实验又失败了？新学期已经到了，你再不努力就要被新来的小鲜肉们赶超了！”
小师弟：“大师姐，这真的不怪我，你看我的实验步骤也没有问题啊，为什么我的检测数据和文献中的实验结果差别这么大！”
大师姐：“哎，这着实令人头大！我们去问问看ELISA专家们是怎么说的。”
大师姐请到了博士德有多年ELISA实验经验的专家，结合小师弟实验中的实际情况，分析如下：引起ELISA测定结果与文献报导不一致的原因主要有三点：试剂因素、标本因素和操作因素。
1. 试剂因素
试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。
不同厂家的试剂一定不能混用，包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异，还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。如：有的厂家酶标板孔间CV值大于20%，标记酶的活性及显色液的稳定性比较差，使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。
要注意试剂的批号和出厂日期，虽然试剂的有效期多为1年，最好选择刚出厂的试剂盒。
避免选择假的ELISA试剂盒。有些厂家为夸大生产ELISA的指标范围，用一种指标来冒充其它指标，造成各种种属、各种指标都可以做的假象。比如用TGF beta这样的指标代替大多数试剂盒的其它指标作为检测抗体，同样可以获得良好的标准曲线。因为TGF beta在大多数哺乳动物中（human, mouse, rat, pig, bovine, etc.）都有广泛表达，种属间的氨基酸序列同源性达100%，TGF beta 随着其他因子的影响，其表达水平也会发生相应的变化，使得实验者难以查觉。
在分析完可能出现的因素后，专家给到以下鉴别方法，大家可以直接去丁香园搜索“如何鉴别真假ELISA试剂盒”
1．利用干扰实验可辨别ELISA试剂盒是否检测目的抗原。
2．如果购买了同一公司的ELISA试剂盒A和B，利用交叉实验可辨别ELISA试剂盒真伪。
3．指标本身也可以鉴定试剂盒的真伪。
2．标本因素和操作因素
血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：
内源性物质
有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
外源性物质
外源性物质常常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。
所以，当ELISA测定结果与预期或文献报导中不一致时，应该首先考虑试剂因素，这个是做好实验获得正确数据的前提保证，其次还有标本因素和操作因素等多方面进行分析，并应采取相应措施排除干扰作用，从而为实验提供正确可靠的检测结果。
聆听了专家的分析后，小师弟赶紧回想了一下自己的实验过程，确实出现了专家列举的一些情况，马上调整重做，终于达到了预期的实验结果。
又到一年开学季，小师弟毫无保留的将精华转述给大家的同时，也奉上了博士德生物特别准备的开学关注礼、分享礼、抽奖礼！
礼品获得方式：
还等什么？手机转发起来，好礼多多，先到先得，送完为止！领奖领到手软！
博士德生物工程有限公司——一家以研发、生产、销售为一体的生物公司，专业服务全球科研工作者25年，产品涵盖抗体、ELISA试剂盒、免疫检测试剂盒、分子生物学试剂盒、重组蛋白、细胞等相关产品，并能提供单、多克隆抗体专项定制服务、探针定制服务、实验代做服务等。Bosterbio（USA）实时了解生物领域研究的风向标，并和国际生物领域巨头建立了长期的项目合作关系，涉及产品研发，技术交流，学术交流等。博士德高品质的产品获得国内外客户的一致好评，得益于公司严谨的研发态度、以及苛刻的产品出厂质量检测标准！
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1. 试剂因素
试剂应选择灵敏度高、特异性好、稳定性好、批间差小、操作方便的试剂。
不同厂家的试剂一定不能混用，包括底物和洗涤液。由于校准标准有差异，还有抗体、检测方法、试剂、交叉反应等因素都会导致对样本的检测结果不一致。如：有的厂家酶标板孔间CV值大于20%，标记酶的活性及显色液的稳定性比较差，使用劣质的试剂必然导致结果的假阳性或假阴性。
要注意试剂的批号和出厂日期，虽然试剂的有效期多为1年，最好选择刚出厂的试剂盒。
避免选择假的ELISA试剂盒。有些厂家为夸大生产ELISA的指标范围，用一种指标来冒充其它指标，造成各种种属、各种指标都可以做的假象。比如用TGF beta这样的指标代替大多数试剂盒的其它指标作为检测抗体，同样可以获得良好的标准曲线。因为TGF beta在大多数哺乳动物中（human, mouse, rat, pig, bovine, etc.）都有广泛表达，种属间的氨基酸序列同源性达100%，TGF beta 随着其他因子的影响，其表达水平也会发生相应的变化，使得实验者难以查觉。
在分析完可能出现的因素后，专家给到以下鉴别方法，大家可以直接去丁香园搜索“如何鉴别真假ELISA试剂盒”
1．利用干扰实验可辨别ELISA试剂盒是否检测目的抗原。
2．如果购买了同一公司的ELISA试剂盒A和B，利用交叉实验可辨别ELISA试剂盒真伪。
3．指标本身也可以鉴定试剂盒的真伪。
2．标本因素和操作因素
血清是最常用的ELISA标本，血浆一般可视为与血清同等的标本，标本引起的假阳性和假阴性结果主要是干扰性物质所致，分为内源性物质和外源性物质两种：
内源性物质
有人认为大约40%的人血清标本中含有非特异性干扰物质，可以不同程度影响检测结果。常见的干扰物质有：类风湿因子、补体、嗜异性抗体、嗜靶抗原自身抗体、医源性诱导的抗鼠Ig (s)抗体、交叉反应物质和其它物质等。
外源性物质
外源性物质常常是由于用于ELISA测定的血标本的采集、贮存等不当所致。如标本溶血、标本被细菌污染、标本贮存过久、标本凝集不全和采血管中添加物等影响。
所以，当ELISA测定结果与预期或文献报导中不一致时，应该首先考虑试剂因素，这个是做好实验获得正确数据的前提保证，其次还有标本因素和操作因素等多方面进行分析，并应采取相应措施排除干扰作用，从而为实验提供正确可靠的检测结果。
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